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    MTT和CCK8區別

    點擊次數:3093 發布時間:2020-12-24

    MTT增殖曲線,基本上就是基礎的功能實驗了,養過細胞的你應該都會做。

    但是,要怎么樣才能省時省力呢?你也知道,如果用MTT的話,加入10ul的MTT后要等四個小時,在活細胞的線粒體中形成甲囋,然后在把培養基吸掉,再加上DMSO溶解,進行檢測。

    這個方法是常用的MTT方法,但是會有三個問題,*個是有的甲囋不容易溶解。

    還有一個問題就是,由于要讓DMSO充分溶解甲囋,所以會要混勻,就會產生泡沫,影響酶標儀讀值:

    第三個問題,就是在吸去培養基的時候,容易把甲囋也吸走,導致終讀值不準。

    當然也不是沒有辦法的,這篇文獻中提到在DMSO中加入8到800mM的氨的堿性DMSO能更快更好地溶解甲囋:

    當然,這個也是有人親測可用的。不過,我們還是來談談另一種溶劑哈,就是傳說中的三聯液,這個其實是1983年Mosmann大神*次發明MTT法時所采用的溶解液:

    初的版本是酸化異丙醇,也就是加入了0.04N的鹽酸的異丙醇。但是后來又衍生成為了:SDS10g,異丁醇5ml,0.1ml的10M HCl,用雙蒸水溶解配成100ml溶液,這就是三聯液。

    三聯液的優點在于不用吸去培養基,當然,缺點就是要溶解很久。不過加完三聯液后可以過夜,第二天再測。

    還有一種檢測方法也很常見,就是CCK8,和MTT的區別就在于……貴。比如MTT要5分錢,CCK8差不多就5毛……還有一點就是,CCK8會形成水溶性的橙色甲囋,MTT形成的是紫色的有機溶劑溶解的甲囋。

    所以CCK8加入后,就直接等4小時左右,讓橙色甲囋溶解到培養基就能檢測了。而MTT,就需要用DMSO再溶解出來……

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