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    細胞凋亡的檢測

    產品介紹

    細胞凋亡的檢測

    應用:
        腫瘤細胞凋亡的檢測
        目的基因瞬轉/穩轉細胞系的細胞調亡研究;小分子化合物/多肽等藥物篩選及功能安全性研究;中藥/中間體等藥物篩選及功能安全性研究;目的基因過表達的基因功能研究;目的基因RNAi干擾的基因功能研究;microRNA過表達/干擾的調控機制研究;


    實驗原理

       細胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,它并不是病理條件下的損傷,而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。
       細胞凋亡檢測的方法很多,我們采用的Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡的原理:磷脂酰絲氨酸(Phosphatidyl serine, PS)正常位于細胞膜的內側,但在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行EGFP融合、熒光素(FITC、PE)或biotin標記,以標記了的Annexin-V作為熒光探針。

    常用的方法

    一、細胞凋亡的形態學檢測

        根據凋亡細胞固有的形態特征,人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。
    1.  光學顯微鏡和倒置顯微鏡

        (1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。
        (2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態。
    2.  熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡

        一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。

        常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA的A-T堿基區。紫外光激發時發射明亮的藍色熒光。

        Hoechst是與DNA特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。DAPI為半通透性,用于常規固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。

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