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    細胞周期實驗外包檢測

    產品介紹

      細胞周期實驗外包檢測是細胞實驗平臺常見實驗之一,也是劍鈍項目組成之一,由經驗豐富的實驗人員進行操作。
     
      本公司實驗過程所用試劑,全部為進口試劑,已實驗的準備性。
     
      細胞周期檢測的原理:
      PI法是經典的周期檢測方法,PI是碘化丙啶(Propidium),一種雙鏈DNA的熒光染料,碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可產生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定,然后根據DNA含量的分布情況,可進行細胞周期和細胞凋亡分析。
      通常正常細胞的G0/G1期具有二倍體細胞的DNA含量(2N),G2/M期具有四倍體細胞的DNA含量(4N),而S期的DNA
      含量介于2N和4N之間。細胞用冰乙醇固定通透后,PI可以與細胞的DNA結合,其熒光強度直接反映了細胞內DNA含量。
      因此,可以通過流式細胞內DNA含量進行檢測,將細胞周期區分為G1/G0期,S期和G2/M期,并可得出各個時期細胞百分數。
     
      細胞周期檢測實驗流程:
      1.收集細胞:A:收集細胞5~20×105于離心管中,若細胞比較小(如淋巴細胞)400g離心,若細胞比較大(如腫瘤細胞)300g離心,5~10min,棄去培養液;
      2.洗滌:加入1ml冷PBS(提前放4℃預冷)洗滌1次,離心棄去上清;
      3.固定前處理:利用管底殘留的液體,輕彈管底,將沉淀重懸成細胞懸液,避免細胞成團;
      4.細胞固定:加入約1ml-20℃預冷的無水乙醇中,輕輕吹打混勻,-20℃固定1h或過夜;
      5.洗滌:加入1ml冷PBS(提前放4℃預冷)洗滌1次,300g離心10min,棄去上清;
      6.RNA酶消化:300g離心5min,吸盡上清后,加入100μL的RNaseA并充分懸浮細胞,37°C水浴30min。
      7.PI染色:加入400μL的PI溶液并充分混勻,4℃避光孵育30 min;
      8.上機檢測:用流式細胞儀在激發波長488nm波長處檢測紅色熒光,低速獲取細胞,采用分析軟件進行DNA含量分析。

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