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    小鼠神經元原代培養

    產品介紹

    實驗步驟

    (1)75% (體積分數)酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

    (2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。

    (3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;

    (4)去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。

    (5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養箱內差速貼壁30min;

    (6)收集上清,臺盼藍染色計數,按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養箱中培養;

    (7)培養第二天,全換液更換為種植液2;

    (8)培養第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;

    (9)之后每周換液兩次。


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